FRET పెప్టైడ్ టెక్నాలజీ

ఫ్లోరోసెన్స్ రెసొనెన్స్ ఎనర్జీ ట్రాన్స్‌ఫర్ (FRET)

ఫ్లోరోసెన్స్ రెసొనెన్స్ ఎనర్జీ ట్రాన్స్‌ఫర్ (FRET) అనేది నాన్-రేడియేటివ్ ఎనర్జీ ట్రాన్స్‌ఫర్ ప్రక్రియ, దీనిలో దాత ఉత్తేజిత స్థితి శక్తి ఇంటర్‌మోలిక్యులర్ ఎలక్ట్రిక్ జంటల పరస్పర చర్య ద్వారా అంగీకరించే ఉత్తేజిత స్థితికి బదిలీ చేయబడుతుంది.ఈ ప్రక్రియలో ఫోటాన్లు ఉండవు మరియు అందువల్ల రేడియేటివ్ కాదు.ఈ పరీక్ష వేగవంతమైన, సున్నితమైన మరియు సరళమైన ప్రయోజనాలను కలిగి ఉంది.

FRET పరీక్షలో ఉపయోగించే రంగు ఒకేలా ఉంటుంది.కానీ చాలా అప్లికేషన్లలో, వాస్తవానికి వివిధ రంగులు ఉపయోగించబడతాయి.క్లుప్తంగా, ప్రకాశించే ప్రతిధ్వని శక్తి యొక్క బదిలీ అనేది దాత సమూహం ఉత్సాహంగా ఉన్నప్పుడు దాత (డై 1) నుండి అంగీకరించేవారికి (డై 2) ద్విధ్రువాలను బదిలీ చేయడం.సాధారణంగా, దాత ఫ్లోరోఫోర్ సమూహం యొక్క ఉద్గార వర్ణపటం అంగీకార సమూహం యొక్క శోషణ స్పెక్ట్రంతో అతివ్యాప్తి చెందుతుంది."రెండు ఫ్లోరోఫోర్‌ల మధ్య దూరం సముచితంగా ఉన్నప్పుడు (10 - 100 ఎ), దాత నుండి అంగీకరించేవారికి ఫ్లోరోఫోర్ శక్తి బదిలీని గమనించవచ్చు."శక్తి బదిలీ పద్ధతి గ్రాహక రసాయన నిర్మాణంపై ఆధారపడి ఉంటుంది:

1. మాలిక్యులర్ వైబ్రేషన్‌గా మార్చబడుతుంది, అంటే శక్తి బదిలీ యొక్క ప్రకాశించే కాంతి అదృశ్యమవుతుంది.(గ్రాహకం కాంతి చల్లార్చేది)

2. ఉద్గారం గ్రాహకం కంటే చాలా తీవ్రంగా ఉంటుంది, దీని ఫలితంగా ద్వితీయ ఫ్లోరోసెన్స్ స్పెక్ట్రమ్‌లో రెడ్‌షిఫ్ట్ ఏర్పడుతుంది.(గ్రాహకాలు ప్రకాశించే ఉద్గారాలు).

దాత సమూహం (EDANS) మరియు అంగీకరించే జన్యువు (DABCYL) HIV ప్రోటీజ్ యొక్క సహజ సబ్‌స్ట్రేట్‌తో ఏకరీతిలో అనుసంధానించబడి ఉంటాయి మరియు సబ్‌స్ట్రేట్ డిస్‌కనెక్ట్ చేయబడనప్పుడు, DABCYL EDANS ను అణచివేయగలదు మరియు తరువాత ఫ్లోరిన్‌కు గుర్తించబడదు.HIV-1 ప్రోటీజ్ డిస్‌కనెక్ట్ తర్వాత, EDANS ఇకపై DABCYL ద్వారా చల్లారదు మరియు EDANS లూసిఫేరేస్‌లను తదనంతరం గుర్తించవచ్చు.EDANS యొక్క ఫ్లోరోసెన్స్ తీవ్రతలో మార్పుల ద్వారా ప్రోటీజ్ ఇన్హిబిటర్ల లభ్యతను పర్యవేక్షించవచ్చు.

FRET పెప్టైడ్‌లు పెప్టిడేస్ అస్పష్టతను అధ్యయనం చేయడానికి అనుకూలమైన సాధనాలు.దాని ప్రతిచర్య ప్రక్రియను నిరంతరం పర్యవేక్షించవచ్చు కాబట్టి, ఇది ఎంజైమ్ కార్యాచరణను గుర్తించడానికి అనుకూలమైన పద్ధతిని అందిస్తుంది.దాత/గ్రహీత ద్వారా పెప్టైడ్ బంధాల జలవిశ్లేషణ తర్వాత ఉత్పత్తి చేయబడిన షీన్ నానోమోలార్ సాంద్రతలలో ఎంజైమ్ చర్య యొక్క కొలతను అందిస్తుంది.FRET పెప్టైడ్ చెక్కుచెదరకుండా ఉన్నప్పుడు, అది అంతర్గత ఫ్లాష్ యొక్క ఆకస్మిక అదృశ్యాన్ని చూపుతుంది, కానీ దాత/అంగీకరించేవారికి ఎదురుగా ఏదైనా పెప్టైడ్ బంధం విచ్ఛిన్నమైనప్పుడు, అది ఒక ఫ్లాష్‌ను విడుదల చేస్తుంది, ఇది నిరంతరం గుర్తించబడుతుంది మరియు ఎంజైమ్ కార్యాచరణను లెక్కించవచ్చు.